Jeffrey Cross
Jeffrey Cross

Odav DIY GFP (roheline fluorestsentsvalk) illuminaator

See ei olnud mõnevõrra jube fetiš, mis mulle luges Worm Breeder's Gazette'i.Pigem räägiti sellest Kathryn Hedgesiga - aruka, kirgliku ja tunnustatud teadlase ja kunstnikuga - The Gazette's näpunäiteid GFP illuminaatori odavaks tegemiseks. GFP või roheline fluorestseeruv valk on fluorestseeruv marker, mida kasutatakse sageli molekulaarbioloogias ja neuroteaduses.

Humbolt State University'i magistriõppes vaidlustati Kathryn, nagu paljud teised teadlased, eelarvekärbete ja toetuste leidmise raskustega. Selleks, et jätkata oma tööd nematood neuronitega sularahaga rihmajaosas, kui tal oli 11-tunnine vajadus uute seadmete järele, vabastas Kathryn oma jõu „vaatame, kuidas me saame seda paremaks ja odavamaks teha”, et hirmutada DIY GFP illuminaator paremasse, teadust väärtustavasse süsteemi, mis suudab visualiseerida neuroneid väikestes ussides vaid 1 millimeeter pikk.

Miks oli see Kathrynile oluline? Tema sõnade kohaselt valis üks minu tüved GFP vastu, kui ma ei valinud kummagi põlvkonna kõige eredamaid usse. Ilma nägemata GFP-d “dissekteerivas” mikroskoobis, kus ma võtsin üksikud ussid väikese traatpatsaga, ei suutnud ma tagada, et kõik nende järglased oleksid fluorestseeruvad, mis on probleem, kui püüan näha, kas ravi kahjustab neid fluorestsentsi kaotamisel. ”

Tulemus: „Ainus mikroskoobid, mis meil GFP-ga olid, ei sobinud suurte usside suurendamiseks, ja sobiva ulatuse ostmine oleks maksnud tuhandeid dollareid. Mul oli oma eelarves 750 dollarit, nii et veetsin umbes 80 dollarit LED-osadele ja ehitasin valgustaja. See ei olnud piisavalt ere, et näha pikki õhukesi rakke, nii et veetsin 825 dollarit tippkvaliteediga filtritel, päästsin vana mikroskoobi okulaari fookustamisobjektiivina ja kasutasin toruliitmikke, et paigaldada see laboratooriumis olevale mikromanipulaatorile. Siis sain valida oma kõige säravamad ussid, tõsta usaldusväärselt läikivaid ussi vastseid ja lõpetada oma katsed. Kui ma oleksin jälginud GFP-s suuremat funktsiooni või oleksin kasutanud punast fluorestseeruvat valku, oleksin ilmselt kasutanud odavaid filtreid ja teinud selle kogu $ 100 alla. Kui ma katseid jätkaks, võin seda illuminaatorit kasutada GFP tüvede ületamisel, et näha, millistel järglastel on mõlemad GFP markerid. "

Kathryni doktoritöö nõustaja julgustas seda tüüpi eksperimente, sest tema ja tema enda doktoritöötaja on välja töötanud oma DIY-seadme, et avastada närvi juhtivuse kiirust väikeses magevees. Prototüüp ripub endiselt lauale teadetetahvlil. Ta mitte ainult ei õpeta loomade füsioloogia üliõpilastele, kuidas neurofüsioloogiat mitteinvasiivselt teha, vaid ta ja tema teadustöötajad on avaldanud andmeid selle meetodi abil andmete kogumiseks. Ta on Backyard Brains Spiker Boxi fänn ja loodab seda näha.

Kathryn suutis oma töö lõpetada, haarates omaenda tööriista, ilma et oleks kulunud keskmisest valgustist tuhandete dollarite eest (isegi kasutatud). Valgusti on kasulik kõigile DIY teadlastele, kes peavad vaatama GFP või RFP (punane fluorestsentsvalk) geenide ekspressiooni bakterites või c. elegans. Ja Kathryn on tõend, mida saate teha peenraha peal.

GFP põhivalgusti üksikasjad alates The Worm Breeder's Gazette on allpool (pärast hüpata). Lisateavet Kathryni paranduste kohta ja tema märkmete vaatamiseks usside kohta vaadake tema postitust Suurepärane värv.

[Krediit Ian Chin-Sangile ja Weiwei Zhongile]

Valgusdioodide kasutamine odavate allikatena GFP ja DsRED tuvastamiseks

Ian Chin-Sang1 ja Weiwei Zhongi bioloogia osakond, kuninganna ülikool, Kingston, ON, Kanada, Rice'i ülikooli biokeemia ja rakubioloogia osakond, Houston TX Kirjavahetus: Weiwei Zhong ([email protected])

Fluorestsentsi tuvastamise komponendid on igasse stereoskoopi paigaldamiseks liiga kulukad. Sageli on meie fluorestseeruvad markerid väga heledad ja ei nõua selliste seadmete täielikku võimsust. Siin tutvustame LED-seadistust, mis maksab ainult umbes 100 dollarit ja suudab tuvastada heledaid fluorestseeruvaid markereid, nagu myo-2 :: GFP. Seadistus (joonis 1) koosneb:

  • X-acto abistab käsi või midagi, mis võib LED-i paigutada (Amazon.com)
  • Lambi juhe, millel on lüliti (kohalik riistvara kauplus)
  • 17-vatise Xitanium LED-draiveriga (LED-toide)
  • Xitanium'i juhtliides (LED-toiteplokk)
  • Soojendussüsteem
  • Kohtobjektiiv (LED-i toiteallikas)
  • Luxeon V Star optiline hoidik (LED-i toiteallikas)
  • Royal-Blue Luxeon V Star LED GFP tuvastamiseks (LED toide) või roheline Luxeon V Star LED dsRED tuvastamiseks (LED toide)
  • Valikuline ergastusfilter: Roscolux # 4290 CalColor 90 sinine GFP jaoks või # 389 Chroma Green, dsRED (Rosco.com | Edmund Optics)
  • Heitkoguste filter: Roscolux # 12 Straw for GFP või # 19 Fire for dsRED (kättesaadavus sama nagu ergastuse filtrid)

Üksikasjad selle kohta, kuidas seda seadet tegelikult ühendada, leiate siit ja siit.

Joonis 1. LED-seadistus

Joonis 2. LED-seadistuse kasutamine müo-2 :: GFP tuvastamiseks mIn1 loomal.

Joonis 3. LED-seadistuse kasutamine myo-2 tuvastamiseks :: dsRED.

LED-i draiverile paigaldamisel veenduge, et valgusdioodil olevad +/- otsad ja lambi juhtme neutraalsed / joone otsad vastavad juhile. Kasutage mittejuhtivat liimi, nagu silikoonliim (Devcon, osa nr 12020, kohalik riistvara kauplus), et objektiivi hoidja LED-i peale panna. Ergutusfiltrit saab liimida objektiivile, rakendades servale väikese koguse liimi. Heitfiltri saab lihtsalt kleepida mikroskoobi eesmärgi all.

Sellel seadmel on pikk tööiga, ei ole vaja soojendamist ega jahutamist ega ole kiirgust. Kuid see suudab tuvastada vaid tugevaid signaale. Oleme kasutanud seadistust järgmiste markerite tuvastamiseks: myo-2 :: GFP (joonis 2), sur-5 :: GFP, ajm-1 :: GFP ja myo-2 :: dsRED (joonis 3).

Valgusdioodide kasutamine odavate allikatena GFP ja DsRED tuvastamiseks


Bio: Eri Gentry on biotehnoloogiaettevõtja, kodanikuteaduste kogukonna korraldaja ja biotehnoloogia esimese häkkeriruumi asutaja San Francisco lahe piirkonnas.

Osa

Jätnud Kommentaari